冬虫夏草对庆大霉素抗菌效力的影响

2020-08-16 编辑：藏红花

作者：郑丰梁兰青黎磊石（全军肾脏病研究所）

摘要：本文采用高效液相等技术分析了天然冬虫夏草总糖、氨基酸、游离脂肪酸等成份含量, 并观察了大鼠肌注庆大霉素同时合并应用含冬虫夏草的血清及冬虫夏草溶液对庆大霉素抗菌效力的影响。结果证明,，冬虫夏草含有与人体相近的氨基酸、徽量元素成份与比例。无论是大鼠肌注庆大霉素同时合并应用含冬虫夏草的血清, 还是冬虫夏草溶液本身对庆大霉素杀灭大肠杆菌或绿脓杆菌的效力都没有明显影响。因而应用冬虫夏草防治氨基糖甙肾毒性损伤不会影响氨基糖甙本身的疗效作用。

氨基糖甙类抗生素是临床治疗严重感染的主要抗菌药物之一, 但肾毒性间题一直妨碍着该药的应用。有报道, 目前临床上遇到的急性肾衰约10%与氨基糖甙类有关。我们通过动物实验及临床研究证实, 冬虫夏草可以减轻氨基糖甙药物肾毒性, 为临床预防及治疗药物肾毒性急性肾损伤提出了一新的有效措施。但冬虫夏草减轻氨基糖甙肾毒性是否同时影响氨基糖甙的抗菌效力? 本实验对此进行观察, 并对冬虫夏草的药物成份进行了初步分析。

实验材料

(一) 大肠杆菌系WHO保留菌株, 本院细菌室提供。

(二) 绿脓杆菌系w HO保留菌株, 本院细菌室提供。

(三) 医用硫酸庆大霉素注封液江苏连云港东风制药厂生产。

(四) 天然冬虫夏草市售正品天然冬虫夏草, 经反复水提、醇提, 最后合并浸液浓缩至0.2g (生药)/m l。

(五)人工虫草注射液江西国药厂制品，2g (生药) / ml 浓度。

(六) SD雌性大鼠体重150g士10g, 由本院动物室提供。

方法与步骤

(一) 冬虫夏草提取液成份测定总糖含量: 蒽酮-醋酸乙酯显色法; 葡萄糖含量:7105自动生化分析, 氨基酸组成: 高效液相色谱分析; 游离脂肪酸含量: 高效液相色谱分析; 甘露醉含量: 气相色谱分析; Cu2+、Zn 2+、Fe2+、Ca2+：原子吸收光谱法。

(二) 体外杭菌试验取无菌试管18 支,分三组。A 组: 天然冬虫夏草+庆大霉素, B组: 人工虫草+庆大霉素；C组: 单用庆大霉素。将庆大霉素原液稀释后, 各组加入冬虫夏草, 每一管接种一定量的大肠杆菌液, 充分混匀置37 ℃培养, 连续观察72 h, 培养液混浊为细菌生长( + )。同时另设4支管, 庆大霉素低浓度(2.08m g/ L ) +人工或天然冬虫夏草高浓度(2 O mg /L) ( 各2 支) , 分别接种大肠杆菌和绿脓杆菌，观察细菌生长情况。结果判定: 培养液混浊为细菌生长( +)。

( 三) 血清杀菌试脸

1血清获取: SD 雌性大鼠6 只, 体重150g士1 0g , 分三组, 按2 0 mg/kg 庆大霉素腹腔注射I/d x 4 日, A 组( 天然虫草组) 同时给天然虫草1 g/ 只灌胃,l/ d ; B 组( 人工虫草组) 给人工虫草4 g/ 只灌胃, l /d; C 组( 对照组), 每日予饮用水2 ml 灌胃。在用药1 天后的第四和第24 h, 用药4 天后的第八和第24h 取血, 分离血清。

2 血清杀菌试验: 取无菌试管2 4 支,分别接种大肠杆菌及绿脓杆菌( 各12 支) , 然后将所获三组大鼠不同时间血清0.5 ml 分别加入各管, 置37 ℃培养72 h。培养液混浊为细菌生长( + )。

结果

(一)冬虫夏草成份

1总糖、葡萄糖含量: 0.2 g /ml而天然虫草提取液中总糖含量为366mmol / L , 相当于天然虫草生药3.3% , 其中葡萄糖占总糖量39%。

2氨基酸成份及含量: 0.2 g ( 生药)/ml 浓度的天然虫草提取液中氨基酸成份及含量如表2所示。

3.游离脂肪酸成份及含量: 0.2g(生药)/ml浓度的天然虫草提取液中游离脂肪酸成份及含量如表3 所示。

4.甘露醇含量: 0.2 g(生药)/ml天然虫草提取液中含甘露醇25.12 g/ L, 相当于天然虫草生药12.56%。

5.Cu2+ ,Zn2 + ,Fe2+，Ca2+ 含量: 0.2g(生药)/ m l 天然虫草提取液中含C u2+ 2μmol/L，Zn2 +22.2μmol/L，Fe2+15.8μmol/L，Ca2+1.55mmol/L

(二) 体外实验结果庆大霉素浓度由33.3mg/L减至4.16 m g / L , 均可有效地抑制大肠杆菌生长。当浓度减至2.0 8 mg / L 时不能抑制大肠杆菌生长。在庆大霉素抗菌同时加人天然或人工虫草, 庆大霉素浓度为2.0 8m g / L 时仍能有效地抑制大肠杆菌生长。

在庆大霉素低浓度(2.08 m g / L ) + 冬虫夏草高浓度( 10mg / L ) 的培养液中大肠杆菌及绿脓杆菌均不能生长。

( 三) 血清杀菌试验结果三组大鼠用药1天后的第四、第24h 血清对大肠杆菌均有良

好的抑制作用。对绿脓杆菌, 第四h 的三组血清能抑制其生长, 而第24 h 的血清仅天然虫草组可有效抑制其生长, 人工虫草组及对照组不能抑制绿脓杆菌生长。

三组大鼠用药4 天后第八、第24 h 血清对大肠杆菌均有抑制作用, 第2 4 h 血清对大肠杆菌也有抑制作用。

讨论

( 一) 冬虫夏草对庆大霉素杭菌作用的影响冬虫夏草作为传统的助阳补虚药, 其主要成份为多糖、氨基酸、脂肪酸、甘露醇及多种微量元素。`它可以调节机体的细胞及体液免疫功能, 增强吞噬细胞的吞噬能力，刺激淋巴细胞转换，并对葡萄球菌、链球菌, 炭疽杆菌等有抑制作用。有研究表明, 冬虫夏草增强免疫功能及抗菌作用的有效成份为多糖及甘露醇等。本实验结果表明, 体外庆大霉素浓度在33.3-4.16 mg / L 时可以有效地抑制大肠杆菌的生长。当浓度减至2.08 mg /L 时则不能抑制大肠杆菌; 同时加入天然或人工虫草后(5 mg/L ) 庆大霉素浓度减至2.08m g / L 时仍有效地抑制大肠杆菌。给大鼠用药1天后的第四h 血清, 无论是单用庆大霉素组, 还是加用天然虫草组或人工虫草组,对大肠杆菌及绿脓杆菌均有良好的抑制作用, 第24h 三组大鼠血清对大肠杆菌均有抑制作用, 而对绿脓杆菌仅天然虫草组血清有抑制作用。用药4 天后的第24 h 三组大鼠血清均能有效地抑制大肠杆菌和绿脓杆菌的生长。说明冬虫夏草与庆大霉素同时应用, 对庆大霉素的抗菌效力不仅没有减弱或拮抗, 可能还有增强作用, 尤其是天然冬虫夏草。人工虫草+ 庆大霉素用药4 天后第八小时血清对绿脓杆菌无抑制作用, 考虑为实验误差。

( 二) 冬虫夏草对庆大霉素杭菌作用影响的意义氨基糖甙抗生素目前仍为临床上用于治疗革兰阴性菌感染的主要药物。但同时带来的肾毒性问题使其应用受到很大限制。近年来, 采用尿N A G 酶,Y- G T 。等检测手段可以早期发现氨基糖甙引起的肾毒性损伤发生, 但迄今尚无可靠有效的方法来预防和治疗氨基糖甙肾毒性损伤。我们近期的动物实验及临床研究发现, 冬虫夏草可以有效地减轻氨基糖甙类抗生素所致的肾损伤, 稳定肾小管上皮细胞内溶酶体膜, 改善肾小管离子转运功能, 促进肾小管上皮细胞的再生与修复。冬虫夏草与庆大霉素协同应用既可减轻其肾毒性, 又不影响庆大霉素血药浓度, 不影响庆大霉素的抗菌效力; 同时其天然合理的氨基酸、游离脂肪酸、微量元素等成份对机体还有良好的补益作用, 值得在今后的临床工作中, 特别是在老年及重危等易发生肾毒性的病例中推广应用。

冬虫夏草疗效作用的成份目前还不清楚。有报道甘氨酸、游离脂肪酸、腺苷、甘露醇等对缺血性急性肾功能衰竭有一定防治作用。但单独应用的剂量都大大超过虫草这些成份的含量, 虫草是否通过这些成份的组合或另有其它成份尚待研究。

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