冬虫夏草含量的测定方法研究

2020-08-17 编辑：藏红花

亚香棒虫草性状与冬虫夏草十分相似，仅从性状上区分不易，建议既要考虑核苷类物质，又要考虑甘露醇、多糖等活性物质。

核苷类物质：高效液相色谱（HPLC）法：核苷类物质的HPLC法一般采用C18色谱长柱，检测波长为260nm。研究者以0.01mol/L磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液（pH=6.5）-甲醇（85:15）为流动相，结果腺苷与前一样品峰可达到完全分离，分离度2.41，保留时间9.9min。采用[0.01mol/L NaH2PO4~0.01mol/L NaH2PO4（1:2.2）]-甲醇（17:3）为流动相，结果鸟嘌呤、胸腺嘧啶、腺嘌呤、腺苷和虫草素等五种冬虫夏草主要核苷均能达到完全分离，且峰形好。采用HPLC法分析了13个产地的冬虫夏草主要有效成分腺苷含量，结果理论塔板数对照品峰计算不低于2000，样品分离良好。根据冬虫夏草苷类成分HPLC指纹图谱的研究结果，发现在选定色谱条件下，尿苷的色谱通常与腺苷的峰面积积分相当，且在各色谱峰中的峰面积积分最大，并依此法测定14批不同产地冬虫夏草药材中腺苷和尿苷的含量。

高效液相色谱与电喷雾质谱联用（HPLC-ESI-MS）法：首次报道了采用HPLC-ESI-MS法测定天然和人工冬虫夏草中腺苷和虫草素的含量，为冬虫夏草的质量评价提供了一种快捷、有效的检测方法。采用HPLC-ESI-MS法，以90%甲醇为提取溶剂，采用多发应检测（MRM）模式测定冬虫夏草及其代用品中腺苷和虫草素的含量。选择性例子检测（SIM）和电喷雾离子化（ESI），以水-甲醇-甲酸（90.0:9.0：1.0，V/V）为流动相，在Shimadzu VP-ODS色谱柱上分离，以2-氯腺苷为内标，建立了定量分析冬虫夏草和蚕蛹虫草中尿苷和腺苷的等度LC/ESI-MS法。该方法简单、灵敏度高且重视性好，可用于测定各种天然冬虫夏草及其代用品中的核苷类活性物质。

研究者还以0.05mol/L磷酸氢二钠植被的硅胶GF254 薄层板，用氯仿-乙酸乙酯-异丙醇-水（8:2:6:0.4:0.8：）混合溶剂10ml中加浓氨水2滴为展开剂，测定波长260nm，参比波长400nm，并与紫外分光光度法比较，两法测得结果一致。

甘露醇：研究者采用容量法测定了冬虫夏草甘露醇含量，水提取法测得量大大高于醇提取法，并优化样品预处理过程为在80℃水浴在北方、用蒸馏水浸提30min。结果表面，虫草甘露醇含量受物种多样性和微生态环境的影响，超过了大的地域气候的影响。

采用比色法测定了冬虫夏草中甘露醇的含量。由于比色法测定的结果可排除样品中其他还原性物质的干扰，其结果较容量法更能代表甘露醇的实际值，故比色法测定结果要比容量法可靠，且方法饿更快速简便。

根据甘露醇能被高碘酸氧化，以联苯胺作显色剂时能在蓝色背景下出现白色斑点的原理，对冬虫夏草中的D-甘露醇经薄层分离显色后，在为295nm及370nm的条件下进行双波长发射锯齿形扫描，测得西藏冬虫夏草中D-甘露醇的含量为8.4%，回收率为98.0%~101.6%。

多糖：采用硫酸-蒽酮比色法于波长（624±1）nm处测定了青岛产冬虫夏草于山西产亚香棒虫草中多糖的含量，结果温度、湿度、硫酸浓度是影响结果的中药因素，以室温20℃，相对湿度低于42℃、98%浓硫酸及供试液于浓硫酸比为1:3时，效果好。亚香棒虫草中多糖含量低于冬虫夏草中多糖含量。

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