铁皮石斛组培技术

2016-09-21 编辑：番红花

铁皮石斛的组织培养技术，大都以茎段、根尖、原球茎、茎尖和种胚等为外植体。除了固体培养外，近几年来还出现了铁皮石斛液体悬浮培养。铁皮石斛组培技术的成熟促进了铁皮石斛产业的发展。

一、铁皮石斛组培技术

（1）茎段培养

1.培养条件

2.取材与消毒

从铁皮石斛植株上切下长2～5cm的幼嫩茎段，在流水下冲洗，用刷子蘸少许洗衣粉水溶液轻轻刷洗，并经自来水充分洗净。在超净工作台上将茎段放置在75%的酒精中消毒30s后，再用0.1%的HgClz水溶液浸泡8～10min，无菌水冲洗5～6次。

3.诱导培养

用解剖刀将铁皮石斛的幼嫩茎段切下，接种在诱导培养基①中进行培养。15～20天后，外植体开始萌动，茎段膨大，切面及顶部组织形成疏松组织。继续培养20天后，转入培养基②中，切面及顶部膨大组织的表面形成凹凸不平的颗粒物，随着培养时间的延长，颗粒物长大形成直径1～2mm的类原球茎颗粒物。

4.增殖培养

将诱导形成的原球茎转入到增殖培养基中，原球茎增殖速度很快，增殖倍数可达3～4倍，同时部分原球茎开始分化出芽点并长出1～2片小叶，原球茎的增殖与芽分化同时进行。

5.生根培养

待增殖芽数量较多时，将高1～2cm、带有2～3片叶的小芽切下转入生根培养基上进行生根培养。培养30天左右，基部开始出现2～3条约1cm长的白色根，随后逐渐伸长，生根率达到90%以上。

6.出瓶苗的过渡管理

当苗高3cm以上、具3～4片叶时，便可出瓶移栽。移栽前，将生根瓶苗打开瓶盖，移至常温下炼苗7天，然后将瓶苗取出，洗去附着在根部的培养基，用 0.01%的高锰酸钾溶液浸泡8～10min，栽种于已灭菌的碎树皮基质中(移栽前浇透水)，放置在遮光度50%～60%、湿度达80%以上的温室中，2 个月后，成活率达90%以上。

铁皮石斛组培技术

（2）种子培养(胚培养)

取人工授粉的铁皮石斛果实，用75%的酒精表面消毒，30秒后再用0.1%升汞消毒8分钟，无菌水冲洗4—5次。

在无菌操作下，把果实切成0.1mm方块，接种到培养基上，每瓶3—5块。研究结果表明，N6培养基对种子萌发和生长最好，蔗糖浓度2%最佳，NAA浓度0.2—0.5mg/L最适合胚的萌发和生长;种子培养中加入椰乳对胚萌发和萌发后的初期生长起促进作用：而香蕉汁对继代培养中石斛的生根和壮苗起促进作用，生根和壮苗培养中不加入NAA，只用N6+10%香蕉汁，苗长得更粗壮。

培养温度25—28C，光照度1600–20001x，每日10—12小时。种子萌发后，转管3—4次，当幼苗长出4—5片真叶并具有3—4条1—2cm长的根时，可将试管苗进行练苗后移栽。

在实验中尚发现，不同胚龄培养，其萌发率不同：胚龄45天以下，萌发率极低，萌发时间长;60天胚龄的胚具34个细胞，萌发率为6%;90天胚龄的胚细胞为74个，萌发率为87%：120天胚龄的细胞数为90个，萌发率95%以上。

实验表明，组织培养的最适胚龄以种子成熟时较好。将萌芽石斛继代培养于N6+10%香蕉汁生根壮苗培养基中，苗长得更粗壮。

（3）茎尖培养

取石斛当年萌发的嫩茎尖，用10%次氯酸钠消毒10分钟，无菌水冲洗4—5次后接种到培养基上。

培养温度为25—28C，光照度1600—20001x，每日10一12小时。研究结果表明，在MS+NAA0.2mg/L+6- BA0.5mg/l培养基中培养30天左右，外植体则可诱导出大小不一的白色颗粒状愈伤组织，再过20天形成不定芽;将愈伤组织和不定芽切割开，再接种到 MS+NAA0.2mg/L+6-BA0.5mg/l中，愈伤组织会增殖并产生不定芽：再将不定芽移到N6+10%香蕉汁中培养30天左右，则会生根长成植株。

（4）原球茎培养

铁皮石斛原球茎悬浮系，用以制作人工种子繁殖体。

实验表明：悬浮培养的最适培养基为1/4MS+维生素C40mg/L，pH5.6，摇床转速为50r/min，15天继代一次，黑暗培养。

培养基中添加ABA0.5mg/L预培养30天，原球茎的质量提高、同步性更好。可以得到分散性好、整齐均一的原球茎。

（5）根尖培养

铁皮石斛离体根尖经愈伤组织形成体细胞胚及直接产生体细胞胚再生植株的过程。

离体根尖在B5+2，4一D1.Omg/L+6-BA3.0mg/L中培养后形成愈伤组织，将其转接到B5+NAAO.5mg/I。+6- BAl.0mg/L培养基中培养14～20天后形成类原球茎，类原球茎分化生成叶和根，并最终形成完整幼苗;而培养在B5+6-BAl.0mg/L中的离体根尖直接转变成类原球茎，而发育成完整小苗。

（6）种子无菌苗培养

以野生铁皮石斛种子为外植体，研究了不同基本培养基、天然附加物和植物生长调节剂对铁皮石斛种子萌发、原球茎增殖与分化和试管苗生根的影响。

结果表明，铁皮石斛种子萌发的适宜培养基为MSq-NAA0.5mg/L+土豆汁10%;原球茎增殖与分化的适宜培养基为MS+6一BA0.5rag/L+NAA0.1mg/L+土豆汁10%;试管苗生根的适宜培养基为Ms+NAA0.2mg/I。+土豆汁10%。

在此条件下建立的铁皮石斛快速繁殖体系，原球茎在增殖与分化培养基上培养3个月左右，可分化出大量高约1～2cm的试管苗，转入生根培养基中培养3个月左右后诱导出大量根系，即可进行大田移栽。

二、铁皮石斛组培苗范围化种植管理技巧

（1）、驯化前的预备工作

1、炼苗

驯化前将瓶苗移至炼苗房进行2-3周的炼苗，让瓶苗从关闭稳固的环境向开放变更的环境过渡，缓缓适应天然环境，等瓶苗成长期硬朗，叶色浓绿时出瓶种植，出瓶苗请求是增殖代数在10代以内，苗长3cm以上，茎粗0.2cm以上，茎有3-4个节间，长有4-6片叶，叶畸形开展，叶色嫩绿或葱绿，根长 3cm以上，有3-5条根，根皮色中带绿，无玄色根，无畸形，无变异。

2、出瓶

出瓶前先将瓶盖翻开，让瓶苗在室外空气中放2-3天，让其适应自然温湿度，在洗苗时将造就基与小苗一起微微掏出，整洁放置于盆中待荡涤，污染苗和裸根苗或少根苗分辨放置，正常组培苗先在自来水洗净培育基，特殊是洗掉琼脂，免得琼脂发霉引起烂根，再换自来水清洗一次，最好一边洗一边对小苗进行分级，可以按高及粗度分三个等级，这样驯化时便利针对不同级别的苗采用不同的管理办法，以便进步苗的成活率和培养出整齐一致的壮苗对裸根或少根组培苗经过上述清洗后，不按期需将小苗根部置于100cm/L生根粉中浸泡15分钟以进行生根引诱，污染苗经由清洗后，用阿米西达浸泡2分钟，后期管理切当可有效节制传染的发生。

3、基质

基质的筹备移栽铁皮石斛组培苗要就地取材，选择合适生长的基质，铁皮石斛的根为气生根，有显明的好气性和浅根性，因此，要求基质以蓬松透气、排水良好且能保肥，不易发霉，无病菌和害虫暗藏者为宜，可以选择腐化松树皮为栽培基质，基质在使用前应当经高温消毒，假如使用茎叶的，应该堆泣，浸泡和蒸煮等处置，某些基质体积技术较厚的可用开水煮高温蒸气蒸20分钟后，取出让其自然冷却凉干待用，目的是将基质内部暗藏的虫卵和病菌杀逝世，减少日后栽培上病虫害发生的机率，基质含水量以60%左右为宜，可增加0.5%三无复合肥(N:P:K:=15%:15%15%)。

4、驯化

场地的抉择铁皮石斛喜暖和、多雾、大风、干净、散射光的环境，切忌阳光直射、暴晒，在栽培进程中要发明条件给予铁皮石斛最佳的生长环境，铁皮石斛原产区大多处于温带和亚热带，全年气象温暖、潮湿，冬季气温都在0℃以上，依据铁皮石斛的生长习惯，就要斟酌驯化场地的光照、温度、通风等天然因素，笔者以为最好取舍在设施大棚内移栽，而且要移载在高架种植畦上，这样容易满意铁皮石斛生长的最佳前提，并且良多因素轻易把持.

在建造铁皮石斛组培苗驯化大棚时要知足以下条件：

(1)驯化大棚要通电通水，通路要求，棚宽6M，长30M，棚肩高1.7M以上，棚顶高2.8M以上，棚顶笼罩塑料无滴薄膜70%遮荫度的遮阳网，棚内安装有自来水管，大棚周围和进口装有40目的防虫网，有条件的，棚内还要装有自动或手动掌握的喷雾体系，(最好既能喷雾又能喷肥、喷药)，这样可以防晒、防虫、保温、透气、还能大大减轻劳动量。

(2)棚内搭建畦底架空的种植畦，可用钢、砖头、木板或方条等资料作为种植畦的框架，然后铺设孔径为0.3-0.5cm基质漏不去的塑料平板作为栽培基质的支撑面，也可用石棉瓦作支持面，每隔10cm打一小孔用来排水透气，要求畦宽1-1.4cm，畦长度可自定，畦底架空高度10-50cm，种植畦上方装有可随时喷雾的喷头，喷雾时间最好能控制，不条件的，也可用喷雾器来取代，搭建这种高架种植的目的是为了使水分和透气控制容易，从而给予组培苗生长最佳的水分不至于积水，保证通风透气，又能同时喷肥、喷药，小苗成活率高，大面积驯化时大大节俭劳能源。

(3)有条件的还可在棚外高于棚顶1m处装置主动喷淋设施，在高温的夏季每隔1小时对棚顶薄膜进行喷不，目标是为了加速棚内降温过程。

(4)种植畦上铺4-6cm厚的基质摊平，移载前用0.3%高猛酸钾或1000倍多菌灵药液对基质进行名义喷晒消毒。

（2）驯化时节和方式

1、驯化季节种植小苗最佳节令是日均匀气温在15-28℃，气温过低或过高均不宜出瓶种植.

普通来说，在铁皮石斛主产地，除了最冷的一、二月以及最热的七、八月，均可种植，局部海拔地域除了十仲春至次年的三月，其余时光均可种植，最好驯化时间为3-5月份。

2、种植方法种植时在种植畦的基质上用手指挖2-3cm深的小洞，轻轻反洗净的铁皮石斛组培苗根部放入小洞内然后用基质盖好，注意不要弄断石斛的肉质根，不要用基质压实根部，让少量根露在空气中，不等同级的小苗和裸根的或少根的最好离开种，以便管理，移栽密度为150/平方，株行距为 6cm×8cm。

（3）驯化管理

1、温度治理

人工驯化铁皮石斛组培苗，要满意冬暖夏凉的要求,梵网经，组培苗生长合适温度为16-30℃夏季温度高时大棚内必需通风散热，并常喷雾来降温保温，天天喷雾3-5次，每次喷雾2-5分钟：冬季气温低时要求大棚内四处密封好，以防冻伤苗。

2、湿度管理

刚移栽的组培苗对水分极敏感，对基质水分的管理原则是“宁少够”以保障基质含水量在60-70%为宜，简略的断定尺度，手抓基质使劲挤，以挤不出水滴即可，基质喷雾过多则渍水烂根，温度高湿度大时还易引发软腐病大规模发生，缺水则生长迟缓，干涸成活率低，移栽后一周内(幼苗尚未发新根)湿度空气保持 10%左右，一周后，植株开始发根可保持70-80%空气湿度，种植畦干湿交替有利发根发芽。

3、肥水管理

大棚驯化期间的施肥以叶面肥为主，由于铁皮石斛为气生根，因此要喷施相宜的叶面肥作为养分液，持续供应植株充分的营养，以利早发根长新芽，叶面肥可以挑选硝酸钾，磷酸二氢钾，腐植酸类叶面肥，入口复合肥，稀释的ms培养基或一些专用肥(如花多多系列)等，一般移栽后10天，植株新根发生生开始喷施 0.1%的叶面肥如硝酸钾或磷酸二氢钾，7-10天喷一次，连续三次，长出新芽后每隔10-15天喷0.3%复合肥等，一般情形下施肥后两天结束浇水，若空气对流太大，则视基质干湿度恰当喷雾补水。

4、病虫害防治

以防备为主，联合防治为准则，因为铁皮石斛是中药材，属于特殊商品，因此在防治过程中，制止使用高毒，高残留农药，有限度地使用部门化学农药，尽量使用物理办法，在必须施用时严格履行中药材标准出产农药使用原则，选用多少种不同类农药品种进行交替使用，防止长期应用单一农药种类，以延缓病虫害抗药性的产生，严厉控制用药量和用药时代，尽量减少农药残留。